发现某个基因突变位点后,如何检测其对基因功能的影响?方法很多
如果这个基因表达蛋白的结构被解析出来的话
可以根据解析出的结构
分析突变是否在蛋白重要的功能位点
实验方法
克隆得到这个基因,
做定点突变得到你需要的突变基因
在细胞中表达
看蛋白在细胞定位有无变化
做coIP看和蛋白相互作用的蛋白有无变化
如果蛋白是个酶的话
看突变前后催化活性的变化
总之,看具体蛋白制定实验
最后最好做一个转基因的小鼠
把突变的基因转到小鼠中
看突变体和野生型的小鼠的不同
去哪购买比较好点的PGK启动子的载体?摘要:HAP转录因子(HAP2/HAP3/HAP4/HAP5) 是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白,它能与酵母中许多启动子上游的CCAAT盒(顺式作用元件)专一性结合, 以增强基因的转录 。在酵母hap5突变株的细胞中,用酵母单杂交系统从水稻cDNA-GAL4表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的cDNA,提示细胞内的氧化还原系统可能作用于HAP蛋白,从而对CCAAT盒的结合活力起调节作用 。对HAP3亚基分子中半胱氨酸残基的突变实验结果支持上述推测 。
关键词: CCAAT,HAP复合物, 转录因子,氧化还原系统
DNA-Binding Activity of the Trans
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